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            實時熒光定量PCR儀的技術原理詳解

            作者:博科再生醫學瀏覽:324文章來源:www.derryth.com時間:2022-05-14

            信息摘要:

            PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數方式增加的,隨著反應循環數的增加,PCR反應不再以指數方式生成模板,從而進入平臺期。在傳統的PCR 中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應的擴增產物,因此用此終點法對

              實時熒光定量PCR儀的技術是指在PCR反應體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
              PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數方式增加的,隨著反應循環數的增加,PCR反應不再以指數方式生成模板,從而進入平臺期。在傳統的PCR 中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應的擴增產物,因此用此終點法對PCR產物定量存在不可靠之處。
              在實時熒光定量PCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的監測和連續地分析擴增相關的熒光信號,隨著反應時間的進行,監測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲 線。在PCR反應早期,產生熒光的水平不能與背景明顯地區別,而后熒光的產生進入指數期、線性期和zui終的平臺期,因此可以在PCR反應處于指數期的某一點上來檢測PCR產物的量,并且由此來推斷模板zui初的含量。

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